黑曲霉ATCC1015 催化16α，17α–环氧黄体酮11α–羟基化及相关P450 基因 诱导表达
摘 要：为了定向遗传改造黑曲霉菌种，研究了黑曲霉(Aspergillus niger)ATCC1015 转化甾体16α，17α–环氧黄体酮活性．转化产物经过薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)以及氢谱、碳谱分析最终确定为11α–羟基–16α，17α–环氧黄体酮．确定了黑曲霉ATCC1015 11α–羟基化活性受底物16α，17α–环氧黄体酮的诱导．鉴于真菌的甾体羟化酶属于细胞色素P450 酶，从黑曲霉ATCC1015 的P450(CYP)基因数据库中筛选出57 个具有编码甾体羟化酶潜力的CYP 基因；利用实时荧光定量PCR 确定了2 个受甾体底物高度诱导的备选目标甾体羟化酶基因AnA100 和AnA154．分别构建了AnA100 基因和AnA154 基因的重组酿酒酵母菌株pYES2-AnA100 和pYES2-AnA154，甾体转化结果显示重组酵母菌pYES2-An100 能够转化16α，17α–环氧黄体酮生成11α–羟基–16α，17α–环氧黄体酮．
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