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瑞替普酶在乳酸乳球菌中的表达

何影影,罗学刚,倪 萌,马德云,王重喜,张同存

摘  要:为建立溶栓药物瑞替普酶(rPA ) 的乳酸菌表达系统,从实验室前期构建的大肠杆菌表达质粒pET22b- rpa 上扩增出目的基因rpa,将该基因与乳酸菌表达质粒pCYT 连接,构建了pCYT- rpa 质粒.此外,为提高rPA 在乳酸乳球菌NZ9000中的稳定性,同时构建了rpa 位于葡萄球菌(Staphylococcal)耐热核酸酶基因nuc 下游融合表达的重组质粒pCYT- nuc-rpa.将质粒pCYT- rpa 和pCYT- nuc- rpa 分别电转化至乳酸乳球菌NZ9000中,经Nisin诱导表达,Western blot 结果显示Nuc 可提高rPA 在乳酸乳球菌中的稳定性,从而增加了rPA 在乳酸菌中的表达量.重组rPA 及Nuc-rPA在复性后均具有溶栓活性,活性分别为800U/L 和1000U/L.

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    津科备27-1号