3 种下呼吸道病原菌qPCR 同步检测法的建立与性能验证
摘 要：建立一种可在 80 min 内同步、精准检测下呼吸道感染 3 种常见病原体，即肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的多重实时荧光定量 PCR（qPCR）方法。针对肺炎克雷伯菌(phoE 基因)、铜绿假单胞菌(gyrB 基因)及金黄色葡萄球菌(nuc 基因)的高保守区，设计并优化特异引物-探针组合，构建高效扩增体系。对检测体系进行性能研究。结果表明，体系对 3个靶标的扩增效率均≥92%，最低检测限均为 500 拷贝/mL，与 8 种常见呼吸道病原菌无交叉反应，重复性变异系数（CV）<5%，保存 12 个月性能稳定。该方法具有高灵敏度、高特异性和稳定性，为临床快速诊断和精准防控提供了有力工具。
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