双抗体夹心ELISA 检测杏仁过敏原Amandin
摘 要:本研究以提取纯化的甜杏仁主要过敏原 amandin 为目标物制备高亲和力的抗 amandin 单克隆抗体。以鼠单克隆抗体为捕获抗体、兔多克隆抗体为检测抗体,通过优化封闭液以及缓冲液 pH 等条件,建立了双抗体夹心 ELISA方法检测 amandin。该方法检测限为(0.8±0.08)ng/mL,线性范围为 5.86~187.5 ng/mL。该方法与芝麻、花生、核桃以及 β 乳球蛋白均无交叉反应,表明特异性良好。添加回收试验中面包、饼干、巧克力回收率范围为82.16%~112.04%,实际样中检测限分别为(9.07±0.23)ng/mL、(7.78±0.18)ng/mL 和(327.37±0.25)ng/mL,说明能够用于实际样品中 amandin 的准确定量分析。
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