莱茵衣藻小G 蛋白ARL1 的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
摘 要:为研究小G 蛋白ARL1 在纤毛生成和纤毛信号转导过程中的作用,特制得一支特异性较强的莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)ARL1 多克隆抗体。构建6×His 标签的原核表达载体pET-28a(+)-arl1,并在大肠杆菌(E. coli)DH5α/C+感受态中诱导表达融合蛋白6×His-ARL1,经纯化后免疫新西兰雄性大白兔。3 次免疫后取耳动脉血清,以间接ELISA 法测试效价后取血。通过Protein A 和抗原抗体亲和纯化后获得了灵敏度高、特异性强的ARL1 抗体。通过免疫荧光和免疫印迹(Western blot)检测,发现大量ARL1定位于细胞质、细胞基体和纤毛,为后续研究ARL1 在莱茵衣藻纤毛生成和信号转导中的功能奠定了基础。
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