HPV18间隔序列介导真核基因以双顺反子形式表达
摘 要:HPV18 是一种 DNA 病毒,其 E6 和 E7 基因可读框(ORF)相隔 8 个核苷酸,以双顺反子形式在宫颈癌细胞HeLa 细胞中表达 E6 和 E7 蛋白。为探究此间隔序列是否在基因双顺反子表达中发挥关键作用,利用此序列构建 2 个双顺反子表达质粒,转染人胚胎肾细胞 HEK293T 细胞,检测上下游 2 个 ORF 表达水平。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示 2 个 ORF 同时转录,免疫印迹(Western blot)结果显示 2 个蛋白同时表达,荧光显微镜结果进一步显示红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达。以上结果证明 HPV18 E6 和 E7 基因间隔序列可在上游 ORF 翻译结束后重新启动下游 ORF 翻译。此现象在真核细胞中比较罕见,分子机制可能与核糖体重新结合有关,值得进一步探究。
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