新型冠状病毒(SARS-CoV-2)免疫检测方法的建立
摘 要:核酸检测是检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的主要检测方法,但该方法实验步骤复杂,检测时间较长,实验条件要求高,故本文研发了两种便捷、高效的免疫检测方法,作为核酸检测的重要补充.本研究通过提取新型冠状病毒核衣壳蛋白(N 蛋白)作为抗原,制备出高特异性单克隆抗体,建立了N 蛋白间接竞争ELISA 法和胶体金免疫层析试纸条两种SARS-CoV-2 免疫检测方法.通过优化间接竞争ELISA 法的N 蛋白包被量、抗体稀释倍数和稀释液pH 等条件,得到该方法的灵敏度IC50为(22.16±1.77)μg/L,最低检测限IC15为(0.31±0.75)μg/L.通过优化胶体金免疫层析试纸条法的N 蛋白和羊抗鼠二抗的稀释倍数、硝酸纤维素(NC)膜种类等条件,得到该方法的可视检测限(vLOD)和临界值分别为62 μg/L 和500 μg/L.两种方法皆可在10 min 左右得出结果,可以作为早期筛查的重要手段.本研究建立的两种新型冠状病毒抗原快速检测方法在SARS-CoV-2的早期检测、预防和控制领域具有良好的应用前景.
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