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莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

刘雁霞,刘思佳,王 慧,黄梦倩,王 岩,樊振川

摘 要:Bardet-Biedl syndrome-1(BBS1)是一种与纤毛信号传导相关的蛋白,关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚.莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,因此制备莱茵衣藻BBS1 蛋白多克隆抗体对阐明其作用机理意义重大.采用RT-PCR 技术从C. reinhardtii CC-125 中提取总RNA,扩增1 731 bp 的目的基因bbs1,插入到pET-28a(+)原核表达载体,成功构建pET-28a(+)-bbs1 重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)经IPTG 诱导后成功表达6×His-BBS1 融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA 法测得抗血清效价达到1∶102 400,经免疫印迹实验(Western blot)对C. reinhardtiiCC-125 检测具有较高特异性.实现了莱茵衣藻BBS1 蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻BBS1 蛋白的多克隆抗体,为研究BBS1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础.



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    津科备27-1号