摘 要：烯酯酰ACP还原酶基因fabI 是脂肪酸合成途径中的关键基因，苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)基因组中有这一基因的同源基因fabI1 和fabI2，为了对中华苜蓿根瘤菌烯酯酰ACP 还原酶基因fabI2 的功能进行深入研究，本实验进行该基因多克隆抗体的制备．从已有的pET-28b-FABI2 质粒中扩增出目的片段，构建了带有GST 标签的原核表达载体pGEX-2T-FABI2，将两个标签的表达载体转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)后，在0.1mmol/LIPTG、20℃、185r/min 条件下诱导6h，分别获得相对分子质量约为2.8×10⁴、5.4×10⁴表达fabI2 的重组蛋白，且均在上清液中以可溶性蛋白的形式存在．将经Ni 柱亲和纯化的6×His-FABI2 融合蛋白免疫新西兰大白兔，4 次免疫后测
效价达256000．进一步将抗血清经过Protein A 纯化获得了高特异性和灵敏度的多克隆抗体．以得到的抗体为一抗，另一个标签的抗原上样进行免疫印迹(Western blot)检测，为单一条带，说明制备的多克隆抗体能够很好地识别FABI2蛋白，并且排除了标签所产生的抗体对Western blot 结果的影响．

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