金黄色葡萄球菌脱水鲨烯脱氢酶(CrtN)和DNA 结合蛋白Sso7d 的融合表达
摘 要：分子质量相对小的DNA 结合蛋白Sso7d 可以帮助蛋白折叠，提高蛋白表达量并有助于晶体生长．为解决金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)脱水鲨烯脱氢酶(dehydrosqualene desaturase，CrtN)蛋白较难在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行可溶表达的问题，借助小分子DNA 结合蛋白Sso7d，将其与CrtN 基因通过重叠PCR(Overlapping PCR)连接起来，连至pET-46 Ek/LIC 载体上，在大肠杆菌BL21(DE3)中进行带有6-His 标签的融合表达．通过核酸电泳及序列测定进而确定所连接基因的正确性，经Ni-NTA 亲和层析与凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)对目的蛋白进行确证．通过对CrtN-Sso7d 以及Sso7d-CrtN 进行分析比较，发现CrtN-Sso7d 的表达量较高且能得到较多高纯度蛋白，这将被用来进行后续蛋白结晶和结构解析工作．
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