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类志贺邻单胞菌噬菌体ФP4-7 裂解酶Gp2 的表达及活性测定

何 洋,荆兆元,杨洪江

摘 要:多重耐药菌株的出现给临床治疗带来了困难,噬菌体编码的裂解酶能够杀死病原菌,是潜在的重要杀菌因子.本实验采用PCR 技术,扩增类志贺邻单胞菌( Plesiomonas shigelloides)噬菌体ФP4-7 裂解酶gp2 基因并克隆至质粒pQE30 上进行表达,重组蛋白采用Ni-NTA 亲和层析法进行纯化.重组裂解酶Gp2 最适反应pH 为9;裂解酶40,℃保温15,min,酶活剩余56.4%,.底物专一性实验结果显示,该裂解酶能够高效裂解5 种革兰氏阴性菌,即铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌( Escherichia coli)、粘质沙雷氏菌( Serratia marcescens)、摩氏摩根菌( Morganella morganii)、弗氏柠檬酸杆菌( Citrobacter freundii),以及3 种革兰氏阳性菌,即金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌( Bacillus licheniformis).杀菌实验结果表明,裂解酶Gp2 可与
EDTA、LAB-35以及SDS配合使用,进一步提高该酶对铜绿假单胞菌和枯草芽胞杆菌的杀菌活性.裂解酶Gp2 具有高效广谱裂菌活性,具有潜在的应用价值.


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    津科备27-1号