睾丸酮丛毛单胞菌CNB1 中2–氨基–5–氯粘康酸半醛脱氢酶的表达纯化与结晶
摘 要:硝基苯类化合物作为一种重要的化工原料,在工业广泛应用的同时也产生了环境污染.目前降解硝基苯类污染物的方法有物理法、化学法和生物法,其中生物修复法具有低成本、无二次污染、生态恢复性好等优点.硝基苯类化合物中的对氯硝基苯是一种高毒、危险的合成品,会对人体造成直接或间接的生理损伤.来源于睾丸酮丛毛单胞菌CNB1(Comamonas testosteroni CNB1)的2–氨基–5–氯粘康酸半醛脱氢酶(2-amino-5-chloromuconic semialdehyde dehydrogenase,CnbD)是对氯硝基苯降解通路中的关键酶.研究CnbD 的晶体结构有助于完善生物修复治理对氯硝基苯污染的机制.实验以睾丸酮丛毛单胞菌CNB1 中的CnbD 为研究对象,将基因cnbD 克隆到pET-28,a(+)上进行原核表达.通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析等纯化方法获得重组蛋白CnbD.在289,K 下获取了2 种重组蛋白CnbD 晶体,并在同步辐射光源BL19,U 光束线的0.10,nm 波长X 射线衍射下得到最高衍射分辨率分别为0.18nm 和0.22nm的衍射数据.采用分子置换法,初步解析了CnbD的同源四聚体结构.
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