摘 要：绿色荧光蛋白是当前在生物及生物医学研究当中应用最为广泛的一种荧光标记蛋白．为开发一种高灵敏度、高特异性以及简单经济的GFP 多克隆抗体，并使之适用于在跨物种细胞里表达的GFP 蛋白进行检测，本文利用gfp基因cDNA 全序列分别构建了带有6×His 和GST 标签的原核表达载体pET28A-gfp 和pGEX-2T-gfp，并将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞进行诱导表达，而后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表达鉴定，分别获得了相对分子质量为2.6×10⁴和5.2×10⁴的重组6×His/GST-GFP 融合蛋白．将亲和纯化的6×His-GFP 融合蛋白免疫新西兰大白兔，采集第5 次免疫后血清用ELISA 测定效价为1﹕32,000．抗血清依次经Protein A 亲和纯化和GST-GFP 抗原抗体纯化后，用免疫印迹实验(Western blot)方法检测抗体特异性，结果表明制备的多克隆抗体能很好地识别在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、HEK293 细胞和大肠杆菌中表达的GFP，对继续开展GFP 相关研究具有重要意义．

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