镰孢霉疫苗表达系统的构建及优化
摘 要：镰孢霉(Fusarium venenatum)是一种具有高效表达和分泌蛋白质潜力的丝状真菌．本文探索以镰孢霉为表达宿主建立真菌蛋白表达系统．以含有Hyg 抗性的pFGL59 为出发质粒，分别利用真菌宿主里常用的强启动子PgpdA、PglaA 和Ptrypsin 构建整合型蛋白表达载体，并通过表达猪流行性腹泻病毒的中和表位蛋白COE，检测该系统的表达效率．通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对工程菌株的胞外蛋白进行分析检测，结果显示在启动子Ptrypsin 的驱动下，COE 蛋白在镰孢霉工程菌中高效表达并分泌到胞外，而含有启动子PgpdA 和PglaA 的工程菌胞外蛋白中未检测到COE 蛋白．根据镰孢霉密码子偏好性对coe 基因的密码子进行优化后，COE 蛋白在镰孢霉中的表达量得到显著提高．该疫苗表达系统的构建为疫苗蛋白在真菌宿主里的异源表达提供了新的方向．
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