热休克蛋白质DnaK 的纯化及其二聚体性质研究
摘 要：通过定点突变技术构建了两个DnaK 蛋白质突变体，研究腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)和腺苷二磷酸(ADP)条件对热休克蛋白质DnaK 二聚体性质的影响．首先诱导表达DnaK 蛋白质的两个突变体DnaK-A303C 和DnaK-H541C，并采用硫酸镍亲和层析和阴离子交换层析对重组蛋白质进行纯化．对等量的DnaK 蛋白质进行氧化交联处理，然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测ATP、ADP 对DnaK 二聚体的影响．研究表明DnaK 突变体在ADP 的存在下以同二聚体的形式存在，但是在ATP 条件下能够形成异二聚体．由此为深入认识热休克蛋白质两个亚基之间的协同作用提供了实验依据．
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