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葡萄糖脱氢酶温控表达菌株的构建及其发酵工艺

李 杨,张志萌,董自星,王正祥,路福平

摘 要:膜结合型的吡咯喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶(mPQQGDH,EC 1.1.5.2)是一种重要的氧化还原酶,因其在血糖诊断及葡萄糖传感器中的重要应用而受到广泛的关注.但是其低表达水平限制了这种酶的大规模工业化生产及应用.本文利用λ 噬菌体的温敏型启动子PL-PR替换葡萄糖脱氢酶基因的启动子,构建了重组菌大肠杆菌(E. coli)B0013-120/pGCd::Km-PL-PR,并使重组菌的酶活比原始菌株提高了21.2%,.再通过发酵条件的优化,确定了mPQQGDH 的最适诱导表达条件为:以甘油为碳源、诱导温度42℃、诱导时间4h、诱导前菌体密度A600=1.6.最后对该酶的酶学性质进行了分析,其最适反应温度和pH 分别为25℃和6.0,所得mPQQGDH 的热稳定性在45℃条件下可维持稳定的活性.这为葡萄糖脱氢酶更广泛的应用及工业化生产奠定了基础.



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