雷斯青霉NADPH-细胞色素P450 还原酶基因的克隆及生物信息学分析
摘 要:工业上利用丝状真菌雷斯青霉(Penicillium raistrickii)转化生产高效避孕药孕二烯酮的关键中间体15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.已知参与雷斯青霉甾体转化反应的关键酶为P450 羟化酶,该羟化酶体系由细胞色素P450 羟化酶和NADPH–细胞色素P450 还原酶(CPR)组成,但有关其15α–羟基化反应的分子基础尚不清楚.根据转录组测序数据库,通过RT-PCR 扩增克隆了一个雷斯青霉NADPH-细胞色素P450 还原酶基因.该基因的开放阅读框为2082bp,编码694 个氨基酸的多肽链,预测的蛋白相对分子质量为7.63×104,具有CPR 蛋白的典型结构域(FMN 结合域、FAD和NADPH 结合域).NCBI BLAST结果显示雷斯青霉CPR与意大利青霉(P. italicum)NADPH–细胞色素P450 还原酶具有较高的同源性,一致性为93%.
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