摘 要：采用PCR 技术从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168 基因组DNA 中扩增其编码嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase，PNP)的两个基因deoD(PNP702)和pupG(PNP816)．以肌苷生产菌枯草芽孢杆菌(B.,subtilis)Q60 为出发菌株，分别采用胞内与胞外分泌过表达PNP 的方式构建4 株重组菌株，通过外源添加底物1，2，4–三氮唑–3–羧氨酰(TCA)的方式直接合成利巴韦林．摇瓶发酵数据显示，胞内过表达PNP702 和PNP816 的利巴韦林产量分别为(8.33±0.57)g/L 和(11.00±0.38)g/L．胞外分泌过表达PNP702 和PNP816 的利巴韦林产量分别为(9.06±0.17)g/L 和(12.67±0.60)g/L．PNP816 的催化效率高于PNP702，胞外分泌过表达比胞内过表达高，其中胞外分泌过表达PNP816 重组菌Q60/pBSApupG 最高，比出发菌(2.02±0.72)g/L 提高了5.3 倍．

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