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产中性蛋白酶工程菌的构建及其发酵条件的初步优化

董逸楠,靳文斌,卜令军,李 玉,路福平

摘 要:为构建1 株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化,以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398 的基因组为模板,采用PCR 技术扩增获得中性蛋白酶基因npr,与高拷贝质粒pWB980 连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600 中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr.在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398,工程菌发酵活力可达1398.3U/mL.通过对其发酵工艺进一步优化,在接种量5%、装液量100mL/500mL、摇床转速180r/min、温度34℃的条件下发酵48h,发酵液的酶活力可达2,487.5U/mL,比优化前提高了78%.

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    津科备27-1号