摘 要：为构建1 株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化，以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398 的基因组为模板，采用PCR 技术扩增获得中性蛋白酶基因npr，与高拷贝质粒pWB980 连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600 中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr．在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398，工程菌发酵活力可达1398.3U/mL．通过对其发酵工艺进一步优化，在接种量5%、装液量100mL/500mL、摇床转速180r/min、温度34℃的条件下发酵48h，发酵液的酶活力可达2,487.5U/mL，比优化前提高了78%．

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