摘 要：为解决胞苷生物合成途径中天冬氨酸氨甲酰转移酶受胞苷三磷酸反馈抑制调节的问题，通过对其碱基序列和蛋白质结构分析，利用基因定点突变的方法构建了大肠杆菌的ATCase 突变酶，得到三个突变体：M1(H20L)、M2(K60E)、M3(K94E)，并在E. coli DH5α 中对融合蛋白进行了表达．酶活测定表明，M1、M2、M3 的ATCase 酶相对活性都比野生型M0 的高，分别为野生型M0 的1.10、1.22 和1.37 倍，且比活力都有不同程度提高．与含野生型pyrBI基因的M0 相比，含突变型基因的M1、M2 和M3 均对15mmol/L 的CTP 具有强的抗反馈抑制作用，且M1、M2 和M3 的抗CTP反馈抑制作用分别是M0 的5.4、6.0 和8.5 倍．最后将各突变质粒转入到E. coli Cyt10(Δcdd)中进行发酵培养，结果表明，与未含突变基因菌株相比，各含突变基因菌株的胞苷积累量均有不同程度的提高，说明ATCase 定点突变使胞苷的合成积累途径得到了不同程度的强化．

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