SAM 合成酶基因的克隆及在酿酒酵母中的高效表
摘 要:采用PCR 技术从S.cerevisiae TCCC 31012 菌株的染色体DNA 中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶-2 基因(sam2),将sam2 克隆到酿酒酵母表达载体pACT2 的强启动子PADH1 控制下,以构建高效表达质粒,并在酿酒酵母亮氨酸缺陷型菌株YS58 中表达.重组质粒经鉴定含有sam2 基因.工程菌YS58-2 表达产物经SDS-PAGE,结果显示重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的分子质量约为43ku,经凝胶电泳扫描,表达带约占菌体总蛋白的14%.YS58-2 菌株培养72h 的SAM 合成酶活力为16.5U/mg 菌体蛋白,较出发菌S.cerevisiae TCCC 31012 提高了40.3 倍,较受体菌YS58 提高了32 倍.
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